Cultivo de anteras alternativa biotecnológica útil para la obtención de plantas doble haploide en especies vegetales

Abstract

El cultivo de anteras es una alternativa biotecnológica muy útil para generar plantas homocigotas de forma rápida. Consiste en la recolección de polen para inducir a la formación de células vegetativas, esto se da por la totipotencia que poseen las microsporas inmaduras para formar una nueva planta. Al momento que se incuba la microspora en cultivo in vitro, puede generar callo o pasar directamente a un embrión, esto depende de la especie. Las panículas de arroz se recolectan a los 67 días del cultivo, en este periodo contienen microsporas en estado uninucleado, los macollos se deben esterilizar con etanol, luego pasan a la cámara de flujo laminar, posteriormente colocarlas en un frasco de vidrio con agua destilada, se separan las anteras de las panículas, se las coloca en medio de cultivo y se las deja en un cuarto oscuro con una temperatura de 24 ºC por unos 34 días. Una de las mejores soluciones para el medio de cultivo es: 2mg /L de 2.4-D, 10 mg/L de AFA, 0.5 mg/L de Cinetina, 80g/L de maltosa y con un pH de 5.8. Para regeneración de callos se usa una solución de: 1 mg/L de ANA, 4 mg/L de cinetina, 30 g/L de sacarosa, 3 g/L Gellan Gum con un pH ideal de 5.8, luego pasan al medio de aclimatación donde salen las raíces y hojas no diferenciadas, finalmente se las mantiene en invernadero. El cultivo de tabaco no pasa por la etapa de callo, se debe recolectar flores cuando la longitud de los sépalos sea igual a la de los pétalos, cada flor se desinfecta y se trasladan al laboratorio donde se colecta polen con pinceles para depositar en placas Petri que es dónde se almacenan a una temperatura aproximada de 4ºC, en la fase de multiplicación uno de los reguladores que da una mayor eficacia es: 0.5 – 1 mL.L-1 es el 6-BAP, de la mano con el ácido 1 – naftalenacético (ANA), las placas Petri que contienen los granos de polen se deben tapar e incubar a oscuridad por 20 días a 27 ºC, posteriormente se las pasa a la luz para cultivarse en tubos con medio de crecimiento básico. Existen algunos inhibidores mitóticos para realizar la duplicación cromosómica entre ellos está la colchicina, que tiene algunos efectos negativos para la salud por ser un alcaloide tóxico, y la orizalina, ambos con una buena efectividad.